【實(shí)驗(yàn)原理】

   細(xì)胞計(jì)數(shù)板的中央有兩個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)池，上面有激光蝕刻形成的網(wǎng)格；網(wǎng)格由9個(gè)主要方格構(gòu)成，角上的4個(gè)方格進(jìn)一步分成16個(gè)較小的方格，中央的主要方格被分為25個(gè)較小的方格，每一個(gè)較小方格被進(jìn)一步分為16個(gè)微型方格，在每個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)池的遠(yuǎn)端是上樣口，待計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸液從此處加入。通過(guò)計(jì)算出一定體積細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)目換算出每毫升細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

Step1

制備細(xì)胞懸液：

①貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶表面脫落；

②漩渦混勻或使用移液器反復(fù)吹吸細(xì)胞懸液，盡量減少細(xì)胞團(tuán)簇；

③懸浮細(xì)胞則可以直接進(jìn)行取樣計(jì)數(shù)；

④細(xì)胞懸液的計(jì)數(shù)濃度：5×10⁵個(gè)細(xì)胞/mL -5×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL。

注意：

1.盡量少、盡量小的細(xì)胞團(tuán)簇；

2.如需計(jì)算活率，則需將細(xì)胞懸液按照1：1的比例加入等量的0.4%的臺(tái)盼藍(lán)染料，混勻后，靜置1~2分鐘。

Step2

2.用純水和75%乙醇清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板表面和蓋玻片，然后用洗耳球吹干，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池上方蓋上專(zhuān)用的蓋玻片；

    注意：最好不要擦拭血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池，防止標(biāo)示線損壞。

Step3

 吸取10ul細(xì)胞懸液沿著蓋玻片一側(cè)緩慢滴加，使細(xì)胞懸液填充蓋玻片與計(jì)數(shù)板之間，注意蓋玻片下不能有氣泡，亦不可讓?xiě)乙旱稳肱赃叞疾壑校?/span>

Step4

 將細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于普通顯微鏡下（10×4）觀察，統(tǒng)計(jì)血球計(jì)數(shù)板的四大格中細(xì)胞的總數(shù)，壓線細(xì)胞遵守“計(jì)左不計(jì)右，計(jì)上不計(jì)下”的原則；

Step4

    細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)目按照以下公式計(jì)算：

【注意事項(xiàng)】

1.取樣計(jì)數(shù)前，充分混勻細(xì)胞懸液，減少測(cè)量誤差；

2.若大方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)過(guò)多，應(yīng)當(dāng)對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再計(jì)數(shù)；

3.若每個(gè)大方格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目相差20個(gè)以上，表示細(xì)胞分布不均，必須對(duì)細(xì)胞懸液混勻后重新計(jì)數(shù)；

4.若顯微鏡下見(jiàn)有兩個(gè)或以上的細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，則需按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若出現(xiàn)多個(gè)細(xì)胞團(tuán)，可能原因?yàn)榧?xì)胞懸液未充分混勻或稀釋倍數(shù)不夠，需要重新混勻或適當(dāng)稀釋后再次計(jì)數(shù)；

5.一個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)板有兩個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)池，為了避免誤差，可重復(fù)計(jì)數(shù)，取平均值。